পলিমারেজ শৃঙ্খল বিক্রিয়া: সংশোধিত সংস্করণের মধ্যে পার্থক্য
বিষয়বস্তু বিয়োগ হয়েছে বিষয়বস্তু যোগ হয়েছে
সাজিদ শরীফ (আলোচনা | অবদান) ট্যাগ: মোবাইল সম্পাদনা মোবাইল ওয়েব সম্পাদনা উচ্চতর মোবাইল সম্পাদনা |
সাজিদ শরীফ (আলোচনা | অবদান) ট্যাগ: মোবাইল সম্পাদনা মোবাইল ওয়েব সম্পাদনা উচ্চতর মোবাইল সম্পাদনা |
||
২১ নং লাইন:
===পদ্ধতি===
পিসিআর সাধারণত ২০-৪০ পর্যাবৃত্তিক তাপমাত্রা পরিবর্তনের একটি সিরিজ নিয়ে গঠিত। যাকে তাপীয় চক্র বলা হয়। প্রতিটি চক্র সাধারণত দুই বা তিনটি বিচ্ছিন্ন তাপমাত্রা পদক্ষেপ নিয়ে গঠিত। সাইক্লিং খুব উচ্চ তাপমাত্রায় (>৯০°সি ;১৯৪°এফ) হয়ে থাকে। ব্যবহৃত তাপমাত্রা এবং প্রতিটি চক্রে প্রয়োগ করা সময়ের দৈর্ঘ্য বিভিন্ন পরামিতির উপর নির্ভর করে। যার মধ্যে রয়েছে ডিএনএ সংশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত এনজাইম, প্রতিক্রিয়ায় দ্বিযোজিত আয়ন, ডিএনটিপির ঘনত্ব, এবং প্রাইমারদের গলনাঙ্ক তাপমাত্রা (টিএম)। অধিকাংশ পিসিআর পদ্ধতির জন্য সাধারণত নিচের আদর্শ পদ্ধতিগুলো ব্যবহৃত হয়:
*প্রারম্ভ: এই ধাপটি ডিএনএ পলিমারেজের জন্য প্রয়োজন। এটি ৯৪-৯৬ °সে (২০১-২০৫ °ফারেনহাইট), অথবা ৯৮ °সি (২০৮ °এফ) তাপমাত্রায় রিঅ্যাকশন চেম্বার গরম করে থাকে। এক্ষেত্রে অত্যন্ত তাপস্থিতিশীল পলিমারেজ ব্যবহার করা হয়। যার আণবিক গঠন ১-১০ মিনিট পর্যন্ত অক্ষুণ্ণ থাকে।
*বিগলন: এই ধাপটি দুটি অংশে বিভক্ত। প্রথম অংশে নিয়মিত সাইক্লিং ইভেন্ট অন্তর্ভুক্ত এবং দ্বিতীয় অংশে প্রতিক্রিয়া চেম্বারটি ৩০ সেকেন্ডের জন্য ৯৪-৯৮ °সি (২০১-২০৮ °এফ) তাপমাত্রায় গরম করা হয়। এর ফলে পরিপূরক ক্ষারগুলোর মধ্যে হাইড্রোজেন বন্ধন ভেঙে ডিএনএ বিগলিত হয় বা ডিন্যাচারেশন হয়। ফলে দুটি একক স্টান্ডবিশিষ্ট ডিএনএ অণু উৎপন্ন হয়।
*অ্যানিলিং: এই ধাপে, প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা ২০-৪০ সেকেন্ডের জন্য ৫০-৬৫ °সে (১২২-১৪৯ ফারেনহাইট) হ্রাস করা হয়। যা একক-আটকে থাকা ডিএনএ টেমপ্লেটগুলির প্রতিটিতে প্রাইমারের অ্যানিলিং করে। ফলে পলিমারাইজেশনের সূত্রপাত ঘটে।
*শিকল বর্ধিতকরন: এই ধাপের প্রয়োজনীয় তাপমাত্রা ব্যবহৃত ডিএনএ পলিমারেজের উপর নির্ভর করে। ট্যাক পলিমারেজ এর তাপস্থিতিশীল ডিএনএ পলিমারেজ জন্য সর্বোত্তম তাপমাত্রা প্রায় ৭৫-৮০ °সি (১৬৭-১৭৬ °ফারেনহাইট) যদিও ৭২ °সি (১৬২ °ফারেনহাইট) তাপমাত্রা সাধারণত এই এনজাইমের সাথে ব্যবহৃত হয়। এই ধাপে, ডিএনএ পলিমারেজ ডিএনএ টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডের পরিপূরক একটি নতুন ডিএনএ স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণ করে এবং মিশ্রণ থেকে ডিএনটিপি যুক্ত করে। যা 5'থেকে-3' দিকে টেমপ্লেটের পরিপূরক। নবজাতক (দীর্ঘায়িত) ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের শেষে 3'-হাইড্রোক্সি গ্রুপের সাথে ডিএনটিপিগুলির 5'-ফসফেট গ্রুপকে ঘনীভূত করে।
*চূড়ান্ত বর্ধিতকরন: এই একক ধাপটি ঐচ্ছিক। তবে ৭০-৭৪ °সি (১৫৮-১৬৫ °ফারেনহাইট) তাপমাত্রায় পিসিআর-এ ব্যবহৃত বেশিরভাগ পলিমারেজের সর্বোচ্চ ক্রিয়াকলাপের ফলে শেষ পিসিআর চক্রের পরে ৫-১৫ মিনিটে কোনও অবশিষ্ট আটকে থাকা ডিএনএ সম্পূর্ণরূপে দীর্ঘায়িত হয়।
*চক্রের পুনরাবৃত্তি: চূড়ান্ত পদক্ষেপটির পরে চক্রের পুনরাবৃত্তি ঘটে এবং শিকল বিক্রিয়ার মতো প্রক্রিয়াটি এগিয়ে যায়।
==ব্যবহার==
| |||